و اهداف
1-1- ضرورت و اهمیت موضوع
سبزیها از نظر دارا بودن انواع ویتامینها، مواد معدنی، مواد پروتئینی، ترکیبات قندی و به لحاظ داشتن مقدار قابل توجهی سلولز که باعث سهولت هضم غذا میشود، نقش بسیار مهمی در تغذیه انسان ایفا میکنند. بسیاری از مواد مورد احتیاج بدن که وجود آنها حتی به مقدار بسیار کم برای ادامه حیات ضروری است مانند ویتامینها در غذاهای حیوانی یافت نمیشود و یا مقدار آنها بسیار کم است، درصورتیکه در سبزیها به حد وفور وجود دارد. تحقیقاتی که توسط کارشناسان علم تغذیه انجام گرفته، بیانگر آن است که وجود سبزیها در غذای روزانه انسان الزامی است، به طوریکه باید 80 درصد حجم کل غذا را محصولاتی مثل میوه و سبزیها و 20 درصد بقیه را مواد پروتئینی و مواد قندی تشکیل دهد. سبزیها به دلیل حجم زیادی که به غذا در دستگاه گوارش میدهند، باعث تسریع حرکات دودی روده شده و در نتیجه به دفع مواد زاید از روده کمک میکنند (دانشور، 1379).
اگزالیک اسید[1] یک اسید قوی به شدت اکسید شده است که به طور گستردهای در طبیعت، گیاهان و حیوانات و همچنین در میان انواع وسیعی از قارچها و میکروارگانیسمها وجود دارد (لانگ و همکاران، 1994). در بین گیاهان بیشترین غلظت اگزالات در خانوادههای پلیگناسه[2]، آمارانتاسه[3] و کنوپودیاسه[4] وجود دارد و از بین گونههایی که در این خانوادهها وجود دارد اسفناج دارای بیشترین مقدار اگزالات است (سیینر[5] و همکاران، 2006). این اسید در اسفناج به صورت اسید آلی و هم چنین کریستالهای معدنی که به صورت نمکهای محلول مانند پتاسیم، سدیم و روی و نمکهای غیر محلول که در روده نمیتوانند جذب شوند و به وسیله مدفوع دفع میشود، وجود دارد. به همین علت جذب کلسیم، آهن و منیزیم علیرغم فراوانی آنها در اسفناج کاهش پیدا میکند (مو[6]، 2008). اگزالات موجود در اسفناج با اتصال به آهن موجود در دستگاه گوارش به یک مولکول بیش از حد بزرگ تبدیل میشود که به خوبی جذب نمیشود و فقط 025/0 درصد آهن جذب میگردد (لانگ و همکاران، 1994).
ریزماهوارهها [7]واحدهای نوکلئوتیدی دو، سه، چهار تا دهتایی تکرار شوندهای هستند که در طول ژنوم موجودات یوکاریوتی مانند گیاهان به وفور یافت میشوند و به علت جهشهای فراوان از تنوع قابل ملاحظهای در بین افراد یک جمعیت برخوردار میباشند. این واحدهای تکراری توسط دو ردیف منحصربهفرد حفاظت شده در دو طرف واحد تکراری محدود شدهاند (داش و همکاران، 1996؛ داویروالا[8] و همکاران، 2000)، بنابراین براساس این توالیهای حفاظت شده میتوان آغازگرهای اختصاصی طراحی نمود و نشانگرهای انحصاری مبتنی بر واکنش زنجیرهای پلیمراز[9] برای هر جایگاه بهدست آورد (نیکولوسی[10] و همکاران، 2000). مطالعات مقایسهای در گونههای گیاهی نشان دادهاند که نشانگرهای ریزماهواره از بسیاری دیگر از نشانگرها متنوعتر بوده و ابزاری قدرتمند برای تمایز بین ژنوتیپها میباشند (پاول و همکاران، 1996 و روسل[11] و همکاران، 1997). نشانگرهایSSR [12] به علت همبارز بودن[13]، چندشکلی[14] بالا، تکرارپذیری بالا و پراکندگی در سراسر ژنوم نشانگرهای قوی هستند (خانام[15] و همکاران، 2012). از این خصوصیات نشانگرهای SSR میتوان برای شناسایی نواحی با ارزش تجاری در طول ژنوم موجودات زنده استفاده کرد.
با توجه به تنوع موجود در گیاه اسفناج و ضرورت جذب آهن توسط موجودات زنده به خصوص انسان میتوان تنوع موجود در آن را از طریق نشانگرهای ریزماهواره تحقیق حاضر با اهداف زیر طراحی و اجرا شد:
1-2 اهداف
1- شناسایی ارقامی که از نظر میزان اسید اگزالیک مطلوب هستند،
2- بررسی میزان تنوع داخلی و بین ارقام اسفناج مورد مطالعه،
3- شناسایی جایگاهها و آللهای ریزماهوارهای که با ژنهای موثر بر تولید اسیداگزالیک و نهایتاً جدب آهن موثر هستند.
فصل دوم: بر پژوهش های انجام شده
1-2- مشخصات گیاه شناسی اسفناج
1-1-2- برگ
اسفناج سبزی برگی یکساله، فصل خنک و علفی متعلق به تیره چغندرسانان (Chenopodiacea) میباشد که برگها و ساقههای ظریف آن به صورت تازه و یا فرآوری شده مصرف میشود (روباتزکی و یاماگوچی[1]،1997).این گیاه دیپلوئید (12=n2) روز بلند و دو پایه است (بالکایا و همکاران، 2005 و عرشی، 1379). اسفناج پس از سبز شدن، برگهای طوقهای تولید میکند به این ترتیب که برگها در یک سطح در اطراف ساقه کوتاهی نزدیک به سطح خاک قرار میگیرند. طی رشد بعدی این ساقه طویل شده و از آن شاخههای جانبی دیگری از محل اتصال برگهای طوقهای به ساقه اصلی منشعب میشوند و ممکن است از ساقه اصلی ساقههای فرعی درجه 1 و 2 نیز به وجود آیند (پیوست، 1384). ساقه در بعضی از انواع اسفناج به رنگ قرمز رنگ دیده میشود که علت آن وجود رنگدانه آنتوسیانین میباشد (اسدی، 1385). ارتفاع بوته اسفناج به 30 تا 60 سانتیمتر میرسد. برگها به طور متناوب روی ساقه قرار میگیرند و شکل برگها متفاوت است. برگهای یک بوته همه یکسان نبوده ولی شبیه به یکدیگر میباشند (کاشی، 1376).
برگها در ارقام مختلف نیز دارای فرم متفاوتی هستند و به شکلهای تخم مرغی، گرد و یا نیزهای وجود دارند. کناره برگها میتواند کاملاً صاف و یا دندانهدار باشد. پهنک برگ نیز صاف و یا دارای چین و چروک است. ارقامی که دارای برگهای چین و چروکدار میباشند، از نظر نگهداری در انبار مناسبتر هستند، زیرا تهویه در آنها بهتر صورت میگیرد، ولی در عوض به سختی قابل شستشو میباشند (اسدی، 1385). در انواع اسفناج برگ صاف، مقدار ماده خشک بیشتری نسبت به نوع برگ چروکیده گزارش شده است (عرشی، 1379). نوع پیچدار در درجه اول برای استفاده تازه در بازار میباشد، نوع برگ صاف و بدون پیچ که برای آزمایشات و پردازشها استفاده میشود و نوع اسفناج کوچک که برای طعم در سالاد استفاده میشود و به خاطر بافت ظریفش ترجیح داده میشود (پجیک[2] و همکاران، 1998). دمبرگها معمولا از نظر طول، هم اندازه پهنک برگ هستند و اغلب زمانی که برگها کاملا رشد میکنند تو خالی میشوند. عادت رشد برگهای اسفناج از خوابیده تا کاملا ایستاده متفاوت است (اسدی،1385).
2-1-2ریشه
ریشه اسفناج از تعداد زیادی ریشههای فیبری جانبی که از یک ریشه اصلی ضخیم منشأ گرفتهاند، تشکیل شده است (روباتزکی و یاماگوچی، 1997). ریشه اصلی عمیق است و میتواند تا عمق 140 سانتیمتری در خاک نفوذ کند.بدین دلیل میتوان اینگیاه را در خاکهای شور به خوبی کشت کرد. ریشههای فرعی این گیاه دوکی شکل و حداکثر تا 60 سانتیمتری در خاک پراکندهاند (پیوست،1384).
2-1-3گل
اسفناج از نظر جنسیت گیاهی دو پایه است و بوتههایی با گلهای نر و بوتههایی با گلهای ماده به وجود میآورد. البته در مواردی هم بوتههای یک پایهای که دارای گلهای نر و ماده روی یک پایه هستند، نیز گزارش شده است(خاتک و همکاران[3]، 2004).اگرچه گیاهان کوچک معمولاً نر هستند، ولی تشخیص جنسیت گیاهان اسفناج نرقبل از گلدهی دشوار است. همچنین بوتههای نر و ماده بر اساس مقدار کربوهیدرات و رنگیزههای موجود در بوتهها شناسایی میشوند. قندها، کلروفیلو مقدار کارتنوئید در گیاهان ماده بیشتر از نر میباشد (عرشی، 1379).
در مناطقی که تابستانهای گرمی دارند به علت گرمای هوا و همچنین به علت طول روز بلند، اسفناج را در پاییز برای برداشت زمستانه و در اسفند ماه برای محصول بهاره و نقاط سردسیر در اوایل بهار کشت میکنند (خوشخوی و همکاران،1374). زمان گل دادن اسفناج باتوجه به زمان کاشت در اکثر موارد در اواخر فروردین تا اوایل خرداد است (اسدی، 1385). گلدهی معمولا از قسمت میانی ساقههای بزرگ شروع شده و به طرف بالا و پایین ساقه ادامه پیدا میکند (عرشی، 1379).
گلهای ماده در اسفناج اغلب در زاویه برگها قرار دارند و دارای تخمدانی چهار یا پنج خامهای است که به دو تا چهار برچه ختم میشود. گلهای نر بدون گلبرگ به صورت خوشهای در طول ساقه به وجود میآیند و گردهافشانی آن بوسیلهی باد صورت میگیرد(عرشی، 1379).
2-1-4 بذر
بذر اسفناج گرد و خاکستری و نسبتأ کوچک است و در بعضی از انواع آن 3 یا 4 برآمدگی شبیه به خار وجود دارد، به همین دلیل آنها را بذر خاردار میگویند. کشت ارقام خاردار قدمت بیشتری دارد، امادر سطح تجاری از بذور صاف استفاده میشود زیرابذرهای صاف از نظر کاشت مخصوصا بوسیله ماشین بذرکار بر انواع بذر خاردار برتری دارند (شیبانی، 1369).
1 Rubatzky and Yamaguchi
1 Pejic
2Khattak
1 Oxalic acid
2 Polygonaceae
3 Amaranthaceae
4 Chenopodiaceae
5 Siener
1 Mou
2 Microsatellite
3 Davierwala
4 Polymerase Chain Reaction (PCR)
5 Nicolosi
6 Russell
7 Simple Sequence Repeats (SSR)
8 Codominant
9 Polymorphism
10 Khanam